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飼料中煙酸的測定

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飼料中煙酸的測定

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1  儀器及試劑

1.1儀 器

1). 分析天平一臺(精度0.1mg);

2). 恒溫水浴鍋一臺;

3). 容量瓶;

4). 微量進樣器(5ul或10μl)一支;

5). 微量可調移液槍(1000ul)一支、吸頭多個

6). 旋渦混勻器一臺;

7). 離心機一臺;

8). LC-10Tvp高效液相色譜儀;

1.2試 劑

1). 超純水(18MΩ?cm);

2). 甲醇,色譜純;

3). 三乙胺;

4). 冰乙酸;

5). 己烷磺酸鈉;

6). 煙酸標準品:含量≥99%;

7). 煙酸標準貯備液;

8). 煙酸標準工作液;

1.3  標準溶液配制

煙酸標準貯備液:稱取經過干燥的煙酸標準純品25.0 mg,置于250ml棕色容量瓶中,用移動相溶解,稀釋至刻度,于冰箱保存,可放置一周。

煙酸標準工作液液:準確吸取煙酸標準貯備液10ml用流動相稀釋至50ml或100ml標準溶液置于帶蓋小瓶貯存,供液相色譜儀分析用,當日使用。

提取液:取500ml離子水,加10ml乙酸,1.3ml三乙胺,用去離子水定容至1L,此時pH為3.2,過0.45 μm濾膜,取上述溶液850mL與150ml醇混合。

2%的乙腈磷酸緩沖液:稱取4.84 g 的磷酸氫二鉀,9.82g 磷酸二氫鉀溶于去離子水中,加20 ml乙腈,用去離子水定容至1 L,混勻用20%氫氧化鉀調節pH至6.5。

碳酸鈉溶液:c(Na2CO3)=0.1 mol/L。

2  樣品制備

稱取試樣維生素預混料0.5-1g或復合預混料1-5g精確至0.0001g。置于100ml的棕色容量瓶中,加入10ml碳酸鈉溶液,浸濕試樣加70ml提取液混勻,于超聲波水浴中振蕩提取15min,用提取液定容至刻度,混合均勻,過濾或離心。再經0.45μm濾膜過濾,進樣測定。

3  色譜條件

色譜柱:Vertex C18色譜柱 250mm×4.6mm×5μm;

流動相:2%的乙腈磷酸緩沖溶液;

流速:1.4mL/min;

溫度:室溫;

進樣量:20μL;

檢測波長:280nm。

4  色譜圖

飼料煙酸.jpg

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