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飼料中泛酸的測定

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飼料中泛酸的測定

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1  儀器及試劑

1.1儀 器

1). 分析天平一臺(精度0.1mg);

2). 超聲波水浴一臺;

3). 容量瓶;

4). 微量進樣器(5ul或10μl)一支;

5). 微量可調移液槍(1000ul)一支、吸頭多個

6). 旋渦混勻器一臺;

7). 離心機一臺;

8). pH計一臺

9). LC-10Tvp高效液相色譜儀;

1.2試 劑

1). 0.1%的磷酸溶液;

2). 1%的乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)溶液

3). 磷酸緩沖液

4). 1mol/L的鹽酸溶液

5). 1mol/L的氫氧化鈉溶液

6). 泛酸鈣標準品:含量≥99%

7). 泛酸鈣標準貯備液

8). 泛酸鈣標準工作液

1.3標準溶液配制

泛酸標準貯備液:準確稱取已知濃度的泛酸鈣標準品0.02g,置于100ml棕色容量瓶中,用0.1%的磷酸溶解,定容至刻度,搖勻。

泛酸標準工作液液:準確吸取泛酸標準貯備液用水按1:10的比例稀釋,現用現配。該溶液濃度為20μg/ml。

磷酸緩沖液:稱取3.12 g 二水磷酸二氫鈉溶于1L水中,用0.1mol/L的氫氧化鈉溶液調節pH為5.5,通過0.45濾膜過濾脫氣使用。

2  樣品制備

2.1復合預混合飼料:稱取試樣1-2g 或維生素預混合飼料0.25 -0.5g,精確至0.0001g,置于100 mL棕色容量瓶中。加60 mL水浸濕,搖勻,加10mL l%的二乙胺四乙酸二鈉溶液混勻,置于超聲波水浴上振蕩提取15min。用水定容至刻度混合均勻,過濾或離心。再經0.45μm濾膜過濾,調整溶液的濃度大于1μg/mL,進樣測定。

2.2濃縮飼料:稱取試樣2-5g ,精確至0.00 01g,置于100ml色容量瓶中。加60ml浸濕,搖勻,加10ml l%二乙胺四乙酸二鈉溶液棍勻,置于超聲波水浴上振蕩提取15 min。提取液若出現混濁,需用幾滴氫氧化鈉溶液和鹽酸溶液調節pH至4.5左右,至溶液澄清(用試紙顯示)沉淀蛋白質,用水定容至刻度,過濾或離心。再經0.45μm濾膜過濾,進樣測定。

3  色譜條件

色譜柱:Vertex C18色譜柱 150mm×4.6mm×5μm;

流動相:磷酸緩沖溶液;

流速:1.0ml/min;

溫度:室溫;

進樣量:20μL;

檢測波長:200nm。

4  色譜圖

飼料泛酸.jpg

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